吖啶酯化學(xué)發(fā)光分析中鏈霉親和素的作用

時間：2021-04-15作者：武漢德晟生化科技有限公司瀏覽：38

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  詞條說明

• WB實(shí)驗(yàn)失敗是否與緩沖劑有關(guān)

  近期了解到有實(shí)驗(yàn)人員反應(yīng)，作WB實(shí)驗(yàn)有失敗的情況，懷疑與實(shí)驗(yàn)中使用的緩沖劑有關(guān)，可能是緩沖劑未滅菌或配制成溶液后感染了細(xì)菌導(dǎo)致的。那么WB實(shí)驗(yàn)的失敗是否真的與緩沖劑染菌造成的呢？ WB實(shí)驗(yàn)即western blot蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)，或稱為免疫印跡實(shí)驗(yàn)，是將電泳分離后的細(xì)胞或組織中蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測技術(shù)。WB實(shí)驗(yàn)失敗的原因有

• 生物緩沖劑（Biological Buffer）之間的不同之處

  Bicine 它是一種兩性離子緩沖液，它與許多常見金屬形成強(qiáng)絡(luò)合物；因此，穩(wěn)定常數(shù)選擇此緩沖液時應(yīng)考慮濃度。它可用于蛋白質(zhì)結(jié)晶的解決方案和作為移動陽離子交換色譜中的相緩沖液和洗脫液。 MES 用于含金屬離子的溶液中，因?yàn)樗粫c大多數(shù)金屬形成絡(luò)合物。MES通常用于酵母，細(xì)菌和哺乳動物細(xì)胞的緩沖培養(yǎng)基中，但濃度高于10 mM時對植物有毒。MES在各種色譜和電泳實(shí)驗(yàn)中也是很好的緩沖液選擇，因?yàn)樗@示出

• 正確選擇緩沖液Tris、HEPES和PIPES及注意事項(xiàng)

  如何選擇緩沖區(qū) 選擇緩沖區(qū)時，重要的是要考慮每個緩沖區(qū)的優(yōu)缺點(diǎn)。首先，您計劃在實(shí)驗(yàn)中使用的試劑的pH范圍必須與您選擇的緩沖液的pH范圍一致。其次，您必須考慮濃度，緩沖液毒性，溫度和反應(yīng)性。緩沖液的濃度必須足以說明您計劃在實(shí)驗(yàn)中使用的酸或堿的量。您計劃使用的pH改變成分越多，所需的緩沖液濃度就越高。緩沖液毒性非常重要，因?yàn)槟承┚彌_液可能會對正在使用的細(xì)胞產(chǎn)生毒性，因此，如果不確定毒性，可以在實(shí)驗(yàn)中使

• 吖啶酯及吖淀酰胺類之間貌合神離的點(diǎn)

  發(fā)光的機(jī)理 發(fā)光反應(yīng)中在形成電子激發(fā)態(tài)中間體之前，聯(lián)結(jié)于吖啶環(huán)上的不發(fā)光的取代基部分從吖啶環(huán)上脫離開來，即未發(fā)光部分與發(fā)光部分分離，因而其發(fā)光效率基本不受取代基結(jié)構(gòu)的影響。 水解機(jī)理 吖啶酯和吖啶酰胺在酸性溶液中(pH小于4.8)都很穩(wěn)定，該類化合物及其與蛋白的偶聯(lián)物在室溫下保存4周，其光量子產(chǎn)率不降低；凍干品在-20℃下，可保存一年以上。但當(dāng)pH大于4.8(尤其是在堿性溶液中),吖啶酯和吖啶酰胺